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    抗體特異性選擇技巧分析
    點擊次數:19 更新時間:2023-10-03

           抗體是哺乳動物適應性免疫系統對抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細胞(效應B細胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識別并結合特異的病原體抗原,隨后通過介導中和作用、調理作用、效應T細胞殺傷等來清除病原體

           特異性(specificity)的本質含義是“Connected with one particular thing only"即只與唯yi的特定事物相關,具有專一性。在免疫學上我們會說“抗體具有特異性",指的就是抗體具有專一性,某一特定的抗體只能與唯yi 一種抗原結合。其實準確來講是一類具有特定抗原表位的抗原,因為某些不同的抗原具有相同的抗原表位(稱為交叉抗原),也可與同一種抗體特異性結合??蒲泄ぷ麟x不開抗體,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體,這幾種實驗方法中的抗體特異性選擇需要考慮的要點了解下,特異性的選擇主要需要考慮四個方面:蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、標記物的特異性。

     

    1.蛋白特異性

    針對需要檢測的蛋白查找抗體,幾個細節要區分:

    a.重組蛋白如果不是全長表達,則需要注意抗體的免疫原區域是否在重組蛋白區域內。

    b.內源性蛋白好能清楚其剪切與修飾的方式,特殊表型的蛋白需要進行序列比對,并結合抗體免疫原序列,查看交叉反應的情況。

    c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點,不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在,不宜一概而論。

     

    2.種屬特異性

    同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。

    a. 目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設計多肽抗原的,根據蛋白的同源性的情況與其他種屬發生交叉反應。需要參照說明書注明的可反應種屬信息。

    b. 一些稀有種屬很難找到抗體,可以通過蛋白的序列比對,選擇同源序列免疫的抗體,不過一般這種情況商不會受理其關于質量的申訴,如果可以申請到免費的抗體樣品,則利于抗體選擇。

     

    3.實驗方法特異性

    目前使用抗體的實驗方法有很多,不同的使用方法過程中,因為對蛋白樣品的處理方式不一樣,蛋白的含量有差異,對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。

     

    4.標記物的特異性

    一般基于實驗操作的實驗方法不會使用帶有標記的一抗,比如 WB、IHC 等,都是通過二抗類的試劑標記達到結果呈現的目的。但是基于儀器分析的一些實驗,可能就會使用到直接標記的一抗,比如流式實驗。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍,針對不通的參數要求選擇對應的標記物。在免疫熒光雙標實驗中,需要選配不同的熒光標記物。

     



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